产品是指能够提供给市场，被人们使用和消费，并能满足人们某种需求的任何东西，包括有形的物品、无形的服务、组织、观念或它们的组合。产品一般可以分为三个层次，即核心产品、形式产品、延伸产品。核心产品是指整体
XL10-Gold Chemically Competent Cell 使用说明书
产品说明：
XL10-Gold是目前转化效率最高的感受态细胞，由Stratagene开发的特异性用于大质粒或珍贵连接产物转化或构建文库的超级感受态细胞。XL10-Gold菌株为Hte(high transformation efficiency)基因型，Hte是Stratagene开发的特异性提高感受态转化效率及大质粒转化能力的宿主菌基因型，已成功应用于40kd质粒的构建。[Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]赋予XL10-Gold缺失几乎所有已知的限制酶切系统；同时缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性；TetR， CamR赋予菌株四环素和氯霉素抗性；lacIqZΔM15的存在使XL10-Gold可用于蓝、白斑筛选。XL10-Gold感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>2×109 cfu/μg。
产品组成：
组 分 | ||
XL10-Gold Chemically Competent Cell | 10 × 100 µL | 50× 100 µL |
pUC19（control vector，10pg/μL） | 10μL | 10μL |
* 基因型：TetR Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (TetR) Amy CamR]
储存条件：
-80℃±10℃保存6个月。请勿将本品置于-20℃或液氮中保存。
使用方法：
1. 将感受态细胞从-80℃冰箱中取出，置于冰水浴中融化。
2. 将目的DNA（质粒或连接产物）加入到100μL感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。
3. 42℃水浴热激35秒（非常重要——Efficiency decreases sharply when cells are heat-pulsed for <30 seconds or for >40 seconds.），立刻置于冰上，静置2～3分钟，晃动会降低转化效率。
4. 向离心管中加入200μL无抗LB、TB或SOC培养基，混匀后于220rpm，37℃摇床振荡复苏60分钟，使转化物表达抗性基因。
5. 根据实验要求吸取适量菌液，涂布至相应抗生素的2YT或LB培养基上，室温正置10分钟，待菌液被平板充分吸收后，37℃倒置过夜培养。
Stratagene standard protocol：
1. Pre-chill a 14-ml BD Falcon polypropylene round-bottom tubes on ice. Preheat NZY+ broth to 42℃.
2. Thaw the cells on ice. When thawed, gently mix and aliquot 100 µl of cells into the pre-chilled tubes.
3. Add 4 µl of the β-ME(β巯基乙醇) to the aliquot of cells.
4. Swirl the tubes gently. Incubate the cells on ice for 10 minutes, swirling gently every 2 minutes.
5. Add 0.1-50 ng of the experimental DNA (or 2 µl of a ligation mixture) to the aliquot of cells.
6. Swirl the tubes gently, then incubate the tubes on ice for 30 minutes.
7. Heat-pulse the tubes in a 42℃ water bath for 30 seconds. The duration of the heat pulse is critical.
8. Incubate the tubes on ice for 2 minutes.
9. Add 0.9 ml of preheated (42℃) NZY+ broth and incubate the tubes at 37℃ for 1 hour with shaking at 225-250 rpm.
10. Plate ≤200 µl of the transformation mixture on LB agar plates containing the appropriate antibiotic (and containing IPTG and X-gal if color screening is desired).
11. Incubate the plates at 37℃ overnight. If performing blue-white color screening, incubate the plates at 37℃ for at least 17 hours to allow color development (color can be enhanced by subsequent incubation of the plates for 2 hours at 4℃).
注意事项：
1. 感受态细胞冰水浴中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目的DNA，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 待转化DNA加入体积不要超过感受态细胞体积的1/10。
3. 待转化DNA加入感受态细胞后，请勿用移液枪吹打，轻轻弹匀即可。
4. 为确保最高效率转化，整个操作过程应尽量轻柔，并保持冰上操作。
5. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
6. XL10-Gold菌株对 <40 µg/ml氯霉素有抗性，但对100 µg/ml氯霉素敏感。
7. XL10-Gold感受态细胞采用常规转化方法，转化效率可达2×109 cfu/μg；如果有更高要求，可尝试Stratagene公司推荐的标准protocol。
厦门比对科技有限公司
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产品是指能够提供给市场，被人们使用和消费，并能满足人们某种需求的任何东西，包括有形的物品、无形的服务、组织、观念或它们的组合。产品一般可以分为三个层次，即核心产品、形式产品、延伸产品。核心产品是指整体
