DH5α Chemically Competent Cell 使用说明书

产品说明：

本品为DH5α感受态细胞，缺失核酸内切酶 (endA)，且为重组酶缺陷型（recA），有利于高纯度质粒DNA的提取，同时减少插入片段的同源重组概率，确保插入DNA的稳定性，为质粒转化、基因克隆提高保障。 lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝白斑筛选。DH5α感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>5×10⁸ cfu/μg。

 产品组成：

* 基因型F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(r_k^-,m_k⁺) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

储存条件：

-80℃±10℃保存6个月。请勿将本品置于-20℃或液氮中保存。

使用方法：

1.       将感受态细胞从-80℃冰箱中取出，置于冰水浴中融化。

2.       将目的DNA（质粒或连接产物）加入到100μL感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。

3.       42℃水浴热激45秒后，立刻置于冰上，静置2～3分钟，晃动会降低转化效率。

4.       向离心管中加入200μL无抗LB、TB或SOC培养基，混匀后于220rpm，37℃摇床振荡复苏60分钟，使转化物表达抗性基因。

5.       根据实验要求吸取适量菌液，涂布至相应抗生素的2YT或LB培养基上，室温正置10分钟，待菌液被平板充分吸收后，37℃倒置培养过夜。

注意事项：

1.       感受态细胞冰水浴中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目的DNA，不可在冰上放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2.       待转化DNA加入体积不要超过感受态细胞体积的1/10。

3.       待转化DNA加入感受态细胞后，请勿用移液枪吹打，轻轻弹匀即可。

      4.       为确保最高效率转化，整个操作过程应尽量轻柔，并保持冰上操作。

附件：DH5α化学感受态细胞使用说明书

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